分離費氏弧菌發(fā)光桿菌菌種方法

本技術方案采用了一種分離費氏弧菌發(fā)光桿菌的方法，包括以下步驟:將膠帶封閉的羊肚菌用75%消毒酒精均勻擦拭后，用燒灼的刀具從菌柄頂端在

火焰上方切割掉子實體頭部，露出的新鮮菌柄橫切面，在火焰上輕快過2-4下，用刀具在新鮮菌柄內側環(huán)割菌柄新鮮菌肉組織并送入抗生素平板培養(yǎng)荃上，于20-30℃的溫度下培養(yǎng)，待萌發(fā)出菌絲后，及時轉接。

費氏弧菌發(fā)光桿菌實體在切割前要基部菌柄完整，用透明膠把費氏弧菌發(fā)光桿菌整個纏繞密封，中間不留空隙。

所述的抗生素平板培養(yǎng)基為:馬鈴薯400g,草炭l00g,葡萄糖20g，磷酸二氫鉀lg,硫酸鎂0. 5g,酵母膏50g，瓊脂20g、水1000mL,鏈霉素30U/mL，青霉素30U/mL, pH6.5

所述抗生素平板培養(yǎng)基的制作方法為:土豆削皮切薄皮加3000m1.水煮30min，過濾取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，過濾取濾液1000mL，在此濾液中加入葡萄糖、酵母膏、瓊脂、磷酸二氫鉀、硫酸鎂，小火煮至瓊脂溶解，定容至1000mL，分裝于三角瓶，在高溫121℃-126'C,高壓0. 1-0. 14MPa滅菌30min。待冷卻至50℃左右加入青霉素鈉、硫酸鏈霉素復合抗生素母液，使抗生素終濃度在30U/ml.左右，將配好的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中或直接冷卻成固體培養(yǎng)基。

本技術的分離方法，先是對費氏弧菌發(fā)光桿菌進行封閉式消毒，防止消毒酒精浸入菌組織，有利分離成功。另外，割掉子實體頭部后，露出的菌柄內側為無菌組織，環(huán)割取內側菌肉組織防雜效果較好。采用抗生素培養(yǎng)基也有利于防止雜菌污染，培養(yǎng)基的組分營養(yǎng)非常全面，特別是加入草炭和酵母膏，為費氏弧菌發(fā)光桿菌菌絲生長提供了保證。本發(fā)明的整個操作過程不用消毒液，全用火焰消毒，萌發(fā)率較高，既保證了容易萌發(fā)，同時也能降低污染，并能較順利的分離到費氏弧菌發(fā)光桿菌菌種。

本實施例的分離費氏弧菌發(fā)光桿菌菌種的方法，包括以下步驟:將膠帶封閉的羊肚菌用75%
消毒酒精均勻擦拭后，用燒灼的手術刀片從菌柄頂端在火焰上方切割掉子實體頭部，露出的新鮮菌柄橫切面，在火焰上輕快過兩下。用手術刀在新鮮菌柄內側環(huán)割菌柄新鮮菌肉組織送入抗生素平板培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)，待萌發(fā)出菌絲后，及時轉接。抗生素平板培養(yǎng)基為:馬鈴薯400g，草炭l00g,葡萄糖20g，磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂0. 5g,酵母膏50g，瓊脂20g、水1000mL，鏈霉素30U/mL，青霉素30U/mL, pH6.5，其制作方法為:土豆削皮切薄皮加3000mL水煮30min，過濾取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，過濾取濾液I000ml,在此濾液中加入葡萄糖、酵母膏、瓊脂、磷酸二氫鉀、硫酸鎂，小火煮至瓊脂溶解，定容至1000mL，分裝于三角瓶，在高溫121℃-126℃、高壓0. 1-0. 14MPa滅菌30min。

待冷卻至50℃左右加入青霉素鈉、硫酸鏈霉素復合抗生素母液，使抗生素終濃度在30U/mL左右，將配好的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中或直接冷卻成固體培養(yǎng)基。其中，費氏弧菌發(fā)光桿菌實體在切割前要基部菌柄完整，用透明膠把費氏弧菌發(fā)光桿菌整個纏繞密封，中間不留空隙。