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    耐藥細胞的特性和操作要點有哪些

    點擊次數(shù):1701  更新時間:2020-12-28
       耐藥細胞的特性:
      1)細胞來源于人正常口腔黏膜組織。
      2)細胞鑒定:Vimentin免疫熒光染色為陽性。
      3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
      4)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
      5)細胞生長方式:不規(guī)則細胞,長梭形,貼壁培養(yǎng)。
     
      耐藥細胞的操作要點:
      1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
     
      2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
     
      3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
     
      4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
     
      5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
     
      6)產(chǎn)品僅用于科研觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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